Оптимизация метода очистки рекомбинантного фактора роста тромбоцитов человека rhPDGF-BB, полученного в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Рекомбинантный тромбоцитарный фактор роста человека rhPDGF-BB является одним из важнейших цитокинов, одобренных для медицинского использования. Препарат, известный под международным непатентованным названием “бекаплермин”, доказал свою эффективность при лечении нейропатических язв, ожогов и травм периодонта (в сочетании с остеокондуктивной матрицей). В исследовании проанализированы способы выделения и очистки rhPDGF-BB и предложена оптимизированная методика, позволяющая получать высокоочищенный rhPDGF-BB из культуральной жидкости метилотрофных дрожжей Pichia pastoris – продуцента rhPDGF-BB. Предложен простой и быстрый метод хроматографической очистки, позволяющий получать rhPDGF-BB чистотой >98% согласно электрофорезу в ПААГ, с содержанием хозяйских белков (HCP) 33 ± 4 нг/мг белка. Эффективная концентрация пролиферативной активности выделенного по оптимизированной методике rhPDGF-BB составляла 5.02 ± 2.64 нг/мл, что сопоставимо с коммерчески доступными аналогами. Разработанная методика может быть использована для получения в промышленности.

Об авторах

А.-А. В. Мистерова

Вятский государственный университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

В. А. Чичерин

Вятский государственный университет

Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

А. С. Герасимов

Вятский государственный университет

Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

Список литературы

  1. Heldin C.H., Westermark B. // Physiol. Rev. 1999. V. 79. № 4. P. 1283–1316.
  2. Fu X., Cheng B. Regenerative Medicine in China. / Ed. X. Fu. Singapore: Springer, 2021. 485 p.
  3. Blume P., Bowlby M., Schmidt B., Donegan R. // Chronic Wound Care Management and Research. 2014. V. 1. P. 11–14.
  4. Kaigler D., Avila G., Wisner-Lynch L., Nevins M.L., Nevins M., Rasperini G. et al. // Expert Opin. Biol. Ther. 2011. V. 11. № 3. P. 375–380.
  5. Younger A., Penner M., Montijo H.E. // Foot Ankle Clin. 2016. V. 21. № 4. P. 771–776.
  6. Patrikoski M., Juntunen M., Boucher S., Campbell A., Vemuri M.C., Mannerstrom B. et al. // Stem Cell Res. Ther. 2013. V. 4. № 2. https://doi.org/10.1186/scrt175
  7. Oefner C., D’Arcy A., Winkler F.K., Eggimann B., Hosang M. // EMBO J. 1992. V. 11. № 11. P. 3921–3926.
  8. Babavalian H., Latifi A.M., Shokrgozar M.A. et al. // Cellular and Molecular Biology. 2016. V. 62. № 8. P. 45–51.
  9. Патент США. 2006. № 7084262.
  10. Sambrook J., Green M.R. Molecular Cloning: a Laboratory Manual.4th Ed. V. 3. N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012. 1546 p.
  11. Ostman A., Backstrom G., Fong N., Betsholtz C., Wernstedt C., Hellman U. et al. // Growth Factors. 1988. V. 1. № 3. P. 271–281.
  12. Dai M., Yu C., Fang T., Ling F., Wang J., Zhang J. et al. // PLoS One. 2015. V. 10. № 12: e0145419. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0145419
  13. Ersson B., Rydén L., Janson J.-C. Introduction to Protein Purification. In: Protein Purification. / Ed. J.-C. Janson. Canada: John Wiley & Sons, 2011. P. 1–22.
  14. Cytiva Life Sciences. Strategies for Protein Purification: Handbook. UK: Little Chalfont, 2021. P. 41–51.
  15. Sánchez-Trasviña C., Flores-Gatica M., Enriquez-Ochoa D., Rito-Palomarez M., Mayola-Deloisa K. // Front. Bioeng. Biotechnol. 2021. V. 9. https://doi.org/10.3389/fbioe.2021.717326
  16. Huang C.J., Damasceno L.M., Anderson K.A., Zhang S., Old L.J., Batt C.A. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2011. V. 90. № 1. P. 235–247.
  17. Schilling D., Reid J. IV, Hujer A. et al. // Biochem. J. 1998. V. 333. № 3. P. 637–644.
  18. Nieto-Taype M.A., Garcia-Ortega X., Albiol J., Luis Montesinos-Seguí J., Valero F. // Front. Bioeng. Biotechnol. 2020. V. 8. № 632.https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00632
  19. Cos O., Ramón R., Montesinos J.L., Valero F. // Microb. Cell. Fact. 2006. V. 5. № 17. https://doi.org/10.1186/1475-2859-5-17
  20. Rahimi A., Hosseini S., Karimi A., Aghdasinia K., Mianroodi R.A. // Biochem. Eng. J. 2019. V. 141. P. 112–119.

Дополнительные файлы


© А.-А.В. Мистерова, В.А. Чичерин, А.С. Герасимов, 2023