Показатели активности ферментов и параметры липидного спектра в клетках печени у детей при хроническом вирусном гепатите C

Полный текст

Хронический вирусный гепатит С является одной из актуальных проблем мировой медицины в связи с его широкой распространенностью и возможностью развития неблагоприятных исходов в виде цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [1-4]. В последние годы эта проблема приобретает все возрастающее значение в педиатрии [5, 6], так как многие вопросы, связанные, в частности, с особенностями патогенеза хронической HCV-инфекции у детей и подростков, остаются нерешенными. В связи с этим несомненный интерес представляет получение информации о метаболических изменениях, происходящих непосредственно в ткани печени у детей при разных стадиях хронизации гепатита С и вызывающих нарушения морфофункциональных параметров этого органа при данном заболевании. На сегодняшний день морфофункциональные поражения печени больных хроническим гепатитом в основном оцениваются по материалу, получаемому при пункцион-ной биопсии. При оценке морфологических изменений в гепатобиоптате при хронических гепатитах используют полуколичественные (ранговые) системы счета [7], которые зачастую являются единственными объективными показателями активности скрыто протекающего процесса, в том числе и у детей [5]. Вместе с тем процедура подобного рода далеко не безразлична для организма ребенка. Поэтому в настоящее время активно продолжается поиск новых, менее травматичных методов обследования, позволяющих уточнить степень поражения печени при данных патологических состояниях. Проявление функциональных возможностей любой клетки живого организма в значительной степени определяется ее внутриклеточным метаболизмом, зависящим от специфики патологического процесса. Параметрами, отражающими направленность и интенсивность реакций в клетках, являются определяемые в них показатели активности ферментов и липидного спектра [8, 9]. Однако в доступной литературе практически нет сведений о комплексных исследованиях, оценивающих метаболизм ткани печени по этим параметрам у детей, больных хроническим гепатитом С. Целью наших исследований явилось определение показателей активности НАД(Ф)-зависимых ферментов и липидного состава в клетках печени у детей, больных хроническим вирусным гепатитом С, и выявление зависимости этих параметров от стадии хронизации заболевания. Обследован 21 ребенок в возрасте от 12 до 16 лет с диагнозом хронического вирусного гепатита С, который устанавливался в условиях специализированного стационара с помощью набора стандартных клинико-биохимических, а также иммуноферментных методов исследования и подтверждался морфологически при пункционной биопсии печени (под контролем УЗИ) с учетом гистологического индекса степени активности и гистологического индекса стадии хронизации [7]. Из общего числа обследованных детей у 11 определялась II стадия хронизации процесса (слабая или умеренная степень активности с умеренно выраженными фиброзными изменениями в печени) и еще у 10 выявлялась III стадия хронизации гепатита С (слабая или умеренная степень активности с тяжелым фиброзом в печени). Биолюминесцентным методом [10] в клетках печени определялась активность ферментов: глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3фДг), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАД- и НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ и НАД-ФИЦДГ), НАД- и НАДФ-зависимой глутаматдегидроге-наз (НаДГДГ и НАдФгДГ), НАД- и НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ и НАДФМДГ), а также глутатионредуктазы (ГР). Активность ферментов выра жалась в микроединицах на 1 микрограмм ткани печени (в мкЕ/мкг). Параметры липидного спектра клеток печени - фосфолипиды (ФЛ), холестерин (ХЛ), свободные жирные кислоты (СЖК), триацилглицериды (ТАГ) и эфиры холестерина (ЭХ) - определялись тонкослойной хроматографией на силуфоле с экстракцией липидов по J. Folch и со-авт. [11] и последующей денситометрией для определения доли (в %) каждой из липидных фракций. Полученные данные обработаны методами статистического анализа с применением пакета прикладных программ Statistica 6,0 и рекомендаций по их использованию в биологии и медицине [12]. В таблицах представлены среднегрупповые показатели (М) и ошибка средней (m). Достоверность различий оценивалась непараметрическим критерием Манна-Уитни (U). В результате исследования выявлен ряд достоверных различий между показателями активности ферментов в клетках печени при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (табл. 1). Например, активность Г6ФДГ при III стадии хронизации выше, чем при II: 22,16 ± 5,02 и 9,86 ± 3,09 мкЕ/мкг (р < 0,05). Также более высоким при III стадии по отношению ко II определен уровень НАДФМДГ - 23,09 ± 5,56 и 9,92 ± 2,43 мкЕ/мкг (р < 0,05). Кроме того, выявлена тенденция к достоверности различий между показателями активности ГР при II и III стадиях хронизации гепатита С: при III стадии уровень активности этого фермента ниже, чем при II (2,96 ± 0,63 и 8,56 ± 3,52 мкЕ/мкг (р < 0,1). Установленные особенности активности ферментов позволили предположить, что синтетические процессы в клетках печени у детей при III стадии хронизации вирусного гепатита С более выражены, чем при II, о чем свидетельствует больший уровень Г6ФДГ при более тяжелой стадии заболевания. Также при усилении тяжести процесса повышается интенсификация конечных этапов цикла трикарбоновых кислот, позволяющая переводить часть малата, образующегося в цикле Кребса, в пируват, что подтверждается более высоким уровнем активности НАДФМДГ при III стадии, по сравнению со II. Вместе с тем при более тяжелой стадии заболевания снижается уровень защиты клеток печени от процессов перекисного окисления липидов: уменьшается активность ГР - фермента антиоксидантной глутатионовой системы. Кроме того, учитывая роль этого энзима в транспорте аминокислот в клетку, можно предположить, что их поступление в клетки печени у детей при III стадии хронизации гепатита С существенно меньше, чем при II. При сравнении показателей липидного спектра в клетках печени у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С установлены достоверные различия между Таблица 1 Активность ферментов (в мкЕ/мкг) в клетках печени у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M ± m) Показатель II стадия хронизации (n = 11) III стадия хронизации (n = 10) Г6ФДГ 9,86 ± 3,09 22,16 ± 5,02 (р <0,05) Г3ФДГ 117,46 ± 20,11 254,87 ± 73,00 ЛДГ 2,41 ± 0,75 7,68 ± 4,09 НАДИЦДГ 1,47 ± 0,66 2,18 ± 0,67 НАДФИЦДГ 11,56 ± 3,87 10,50 ± 3,84 НАДГДГ 329,04 ± 87,55 289,91 ± 52,83 НАДФГДГ 7,00 ± 1,48 11,83 ± 3,00 НАДМДГ 164,63 ± 32,26 174,96 ± 36,77 НАДФМДГ 9,92 ± 2,43 23,09 ± 5,56 (р <0,05) ГР 8,56 ± 3,52 2,96 ± 0,63 (р1 < 0,1) 8 Российский медицинский журнал Таблица 2 Содержание липидов в клетках печени у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M ± m) Показатель II стадия хронизации (n = 11) III стадия хронизации (n = 10) ФЛ, % 12,69 ± 0,94 11,63 ± 0,81 ХЛ, % 13,92 ± 0,99 17,39 ± 1,31 (р1 < 0,05) СЖК, % 16,03 ± 1,23 23,01 ± 1,15 (р1 < 0,001) ТАГ, % 18,30 ± 1,91 14,93 ± 1,84 ЭХ, % 39,06 ± 1,20 33,05 ± 2,12 (р1 < 0,05) ХОЛ/ФЛ 1,12 ± 0,08 1,53 ± 0,13 (р1 < 0,05) СЖК/ТАГ 0,91 ± 0,10 1,56 ± 0,10 O1 < 0,001) большинством из исследуемых параметров (табл. 2). Так, например, в клетках печени у больных с III стадией хронизации инфекционного процесса количество ХЛ определяется на большем уровне, чем в клетках детей со II стадией: 17,39 ± 1,31 и 13,92 ± 0,99% (р < 0,05). За счет повышения количества ХС при III стадии хрониза-ции увеличивается и соотношение ХЛ/ФЛ по сравнению с этим же показателем, определяемым при II стадии: 1,53 ± 0,13 и 1,12 ± 0,08 (р < 0,05). Вместе с тем содержание ЭХ при более тяжелой стадии определяется ниже, чем при II: 33,05 ± 2,12 и 39,06 ± 1,20% (р < 0,05). Кроме того, при III стадии хронизации увеличивается количество СЖК в клетках печени по сравнению со II (23,01 ± 1,15 и 16,03 ± 1,23%; р < 0,001). В связи с этим и соотношение СЖК/ТАГ у больных с III стадией больше, чем со II: 1,56 ± 0,10 и 0,91 ± 0,10 (р < 0,001). Таким образом, в результате наших исследований установлено, что липидный спектр в клетках печени у детей с III стадией хронизации вирусного гепатита С имеет следующие отличия от аналогичных параметров, определяемых у детей со II стадией хронизации этого заболевания: - более высокое количество ХС (одного из основных структурных липидов, преобладающее количество которого синтезируется именно в печени) и как следствие повышенное соотношение ХОЛ/ФЛ, что определяет увеличение микровязкости и снижение проницаемости клеточных мембран, приводящих в свою очередь к нарастанию функциональной недостаточности органа при усугублении тяжести заболевания; - меньшее содержание ЭХ, что подтверждает активацию синтеза самого холестерина при этой стадии хронизации; - повышенное содержание СЖК и увеличенное в связи с этим соотношение СЖК/ТАГ, что свидетельствует о преимущественной направленности липидного обмена в сторону липолиза. Таким образом, полученные в результате наших исследований показатели активности внутриклеточных ферментов и липидного состава в ткани печени у детей с разными стадиями хронизации вирусного гепатита С позволили раскрыть некоторые особенности метаболизма в клетках печени при этом заболевании. Эти особенности заключаются в интенсификации процессов пентозофосфатного пути, конечных этапов цикла Кребса и снижении уровня антиок-сидантной защиты клеток в сочетании с перестройками их липидных структур, проявляющимися в повышении уровня ХС, смещении липидного обмена в сторону липолиза и накоплении СЖК при III стадии, по сравнению со II. Выводы 1. У детей в возрасте от 12 до 16 лет, больных хроническим вирусным гепатитом С, активность внутриклеточных ферментов в печени зависит от стадии хронизации заболевания, а показатели активности энзимов указывают на интенсификацию процессов пентозофосфатного пути, конечных этапов цикла Кребса и снижение уровня антиоксидантной защиты клеток в группе детей с III стадией хронизации по сравнению с аналогичными параметрами, определяемыми при II стадии. 2. Изменения липидного состава клеток печени у детей 12-16 лет при хроническом вирусном гепатите С зависят от стадии хронизации этого заболевания и заключаются в следующем: повышении уровня ХС, смещении липидного обмена в сторону липолиза и накоплении в клетках СЖК при III стадии хронизации по сравнению со II.

Об авторах

Вадим Геннадьевич Булыгин

ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера» СО РАМН

Email: impn@impn.ru

Геннадий Викторович Булыгин

ГОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого; ФГБУ «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера» СО РАМН

Список литературы

Дополнительные файлы