Влияние терапии тактивином на Т-лимфопоэз при тимомегалии у детей раннего возраста с острым обструктивным бронхитом

Полный текст

У детей раннего возраста часто наблюдается гиперплазия лимфоидной ткани, в том числе ткани вилочкой железы - тимомегалия [1-3]. Множество проведенных исследований показывают, что такие дети уже на первом году жизни чаще болеют острыми респираторными инфекциями, анемией, рахитом, различными нарушениями питания, у них чаще развиваются аллергические реакции [2-4]. В возрасте до 3 лет более половины детей с увеличенной вилочковой железой относятся к группе часто болеющих детей с более тяжелым и длительным течением ОРВИ [1]. Подобные клинические проявления являются результатом нарушения функцио18 Российский медицинский журнал нирования иммунной системы при тимомегалии [1, 5-7]. Было выявлено, что при гиперплазии вилочковой железы у детей, несмотря на увеличение количества тимоцитов в ней, наблюдается Т-лимфопения с преимущественным снижением СБ4+-клеток [1, 7, 8]. В предыдущих работах нами было проведено исследование функционального состояния вилочковой железы при тимомегалии у детей, а именно изучение процессов Т-лимфопоэза посредством показателей, характеризующих эмиграцию Т-клеток из нее; было показано, что функциональная активность вилочковой железы у детей с тимомегалией снижена по сравнению с возрастной нормой [9, 10]. Ранее было показано, что иммуномодулирующий препарат тактивин оказывает положительное влияние, направленное на предупреждение частых интеркуррент- ных инфекций при тимомегалии у детей [11]. При терапии тактивином детей с тимомегалией во время острого респираторного процесса отмечается положительная динамика: более быстрое исчезновение кашля, менее выраженные катаральные явления, отсутствие затяжного и осложненного течения заболевания, в иммунологическом плане тактивин способствует увеличению количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций (СБ4, CD8) [1, 11]. В настоящей работе мы провели исследование влияния иммуномодулятора тактивина («Биомед») на Т-лимфопоэз при тимомегалии у детей раннего возраста с острым обструктивным бронхитом (ООБ). Оценку Т-лимфопоэза осуществляли по уровню ТРЭК (Т-рецепторных эксцизионных колец). ТРЭК представляют собой кольцевидные молекулы ДНК, которые формируются в процессе перестройки генов Т-клеточного рецептора при дифференцировке Т-лимфоцитов в ви- лочковой железе [12]. Данные структуры определяются только в Т-клетках, недавно эмигрировавших из нее и служат мерой интенсивности созревания Т-лимфоцитов и их эмиграции из вилочковой железы, т.е. функциональной активности этого органа [13, 14]. Материал и методы Уровень ТРЭК определяли у 8 детей с тимомегалией в возрасте от 1,5 мес до 1 года. У всех детей был диагностирован ООБ в стадии разгара. Больные находились на стационарном лечении в Морозовской детской городской клинической больнице. С момента поступления дети получали тактивин («Биомед») интраназально в дозе 1 мкг/ кг ежедневно в течение 5 дней [11]. Тяжесть состояния: лихорадка с температурой тела более 39°С, вялость, кашель, втяжение межреберных промежутков, появление цианоза, учащенное шумное дыхание со свистящим выдохом, рассеянные сухие хрипы, а иногда и влажные среднепузырчатые хрипы в легких, отказ от питья, «воспалительные» изменения в анализе периферической крови и другие признаки интоксикации - явилась основанием для назначения всем детям антибактериальной терапии. Для лечения бронхообструктивного синдрома включали мероприятия по улучшению дренажной функции бронхов, противовоспалительную и бронхолитическую терапию. Помимо тактивина другие иммуномодуляторы в лечении детей этой группы не применялись. Забор крови проводили дважды: до начала лечения и через 1 день после окончания терапии тактивином. В группу сравнения вошли 3 ребенка с ООБ и ти- момегалией, находящиеся на стационарном лечении и получающие аналогичную терапию, но без введения тактивина, обследованные при поступлении и повторно через 6 дней. Из периферической крови обследованных детей выделяли мононуклеары путем центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколла-верогра- фина (Sigma). Из 1*106 мононуклеаров выделяли ДНК с помощью набора «Проба НК» («ДНК-Технология»). Для постановки ПЦР использовали набор TaqMan Univrsal PCR Master Mix Reagents Kit (Applied Biosystems). Для определения ТРЭК использованы праймеры: прямой 5’- CGT GAG AAC GGT GAA TGA AGA GCA GAC A-3’, обратный 5’-CAT CCC TTT CAA CCA TGC TGA CAC CTC T-3’, зонд 5’-FAM-TTT TTG TAA AGG TGC CCA CTC CTG TGC ACG GTG A-MGB-3’ («Синтол») [15]. Объем смеси для ПЦР составлял 25 мкл. Программа амплификации на приборе 7300 Applied Biosystems Realtime PCR System: 1 цикл - 50°С 2 мин, 95°С 10 мин; 50 циклов - 94°С 30 с, 60°С 30 с. Расчет числа копий ТРЭК проводили с использованием стандартной кривой, построенной по разведениям плазмиды с известной концентрацией ДНК ТРЭК. Плазмида получена путем клонирования ДНК ТРЭК тимоцитов человека в вектор pJet1.2/Blunt (Fermentas). Результаты представлены числом копий ТРЭК на 1 тыс. лимфоцитов. Статистическую обработку проводили методами непараметрического анализа. Исследованные количественные показатели представлены в виде Ме (LQ - UQ), где Ме - медиана, LQ - нижний квартиль, UQ - верхний квартиль. Для анализа связи различий между связанными выборками применяли критерий Вилкоксона. Различие групп полагали статистически значимым при р<0,05. Результаты и обсуждение В предыдущих статьях нами было подробно охарактеризовано состояние Т-лимфопоэза, оцениваемое по уровню ТРЭК, при тимомегалии у детей [9, 10]. В настоящей работе мы попытались исследовать тимопоэз при воздействии пептидных гормонов тимуса (на примере тактивина). Измерение уровня ТРЭК проводили после применения тактивина (5-дневный курс интраназально) в небольшой группе детей раннего возраста с ООБ и ти- момегалией. Вопрос о клинической эффективности тактивина в лечении острых респираторных заболеваний достаточно широко изучен [1, 11, 16]. В нашей работе мы не касались этой области, а лишь попытались оценить ти- мопоэз после применения тактивина по содержанию недавних эмигрантов из тимуса у детей раннего возраста с тимомегалией и ООБ. Полагаем, что такое исследование правомочно, так как тактивин является аналогом тимических гормонов - модуляторов функционирования Т-лимфоцитов и эпителиальных клеток. Уровень ТРЭК у детей с тимомегалией и ООБ до терапии тактивином составил 17,62 (11,81-35,72) копий на 1 тыс. лимфоцитов (17,36 (8,29-29,33) копий на 1 тыс. лимфоцитов в группе сравнения). Ранее нами было показано снижение содержания ТРЭК при тимоме- галии в сравнении с детьми с нормальными размерами вилочковой железы [10]. В таблице представлены данные по динамике уровня ТРЭК у детей раннего возраста с тимомегалией после Влияние терапии тактивином на численность ТРЭК (копий на 1 тыс. лимфоцитов) в лимфоцитах периферической крови детей раннего возраста с тимомегалией Группа При поступлении Через 6 дней Дети, получавшие 17,62 58,10* терапию тактивином (11,81-35,72) (27,43-80,40) Группа сравнения 17,36 (8,29-29,33) 10,02 (9,87-21,33) Примечание. * - p = 0,01 относительно содержания ТРЭК до лечения. № 4, 2015 19 лечения тактивином. Как видно из таблицы, добавление тактивина (интраназально в течение 5 дней) в комплексное лечение ООБ приводит к статистически значимому повышению содержания ТРЭК: до 58,10 (27,43-80,40) копий на 1 тыс. лимфоцитов периферической крови (р=0,01 для критерия Вилкоксона). Причем уровень ТРЭК достигает 80% содержания ТРЭК у здоровых детей без тимомегалии - 73,34 (53,99-83,84) копий на 1 тыс. лимфоцитов (р=0,4) [10]. В группе сравнения уровень ТРЭК-содержащих клеток не изменяется (p>0,05 для критерия Вилкоксона). Таким образом, наше исследование показало статистически значимое повышение содержания ТРЭК в лимфоцитах периферической крови после применения тактивина в комплексной терапии ООБ (p=0,01 для критерия Вилкок- сона). Причем уровень ТРЭК практически достигал содержания ТРЭК у детей без тимомегалии. Следовательно, можно сделать предположение, что добавление тактивина в комплексное лечение ООБ может способствовать восстановлению Т-лимфопоэза при тимомегалии. До настоящего времени считалось, что основой фармакологического действия тактивина является стимуляция Т-клеточного иммунного ответа при его снижении: усиление выработки Th1-цитокинов (в том числе IL-2 и IFNy) и активности цитотоксических Т-клеток, нормализация численности Т-лимфоцитов, соотношения Т- и В-клеток, а также субпопуляций Т-клеток; кроме того, он оказывает благоприятное действие на функцию кроветворных стволовых клеток [11, 16, 17]. Предполагалось, что пептидные гормоны тимуса обусловливают некоторое «дозревание» Т-лимфоцитов в периферическом отделе иммунной системы, однако точных экспериментальных данных, подтверждающих этот феномен, не существовало [18]. Настоящая работа показывает, что еще одним эффектом лекарственных препаратов на основе пептидов вилочковой железы может являться их влияние на дифференцировку Т-клеток. Однако для утверждения о том, что фармакологическое действие так- тивина связано с его влиянием на эмиграцию Т-клеток из вилочковой железы необходимо увеличить объем выборки и продолжить исследования в этом направлении.

Об авторах

П. Д Ваганов

ГБОУ ВПО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России

117997, Москва, Россия

Альмира Дмитриевна Донецкова

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Email: almira_donetskova@yahoo.com
канд. мед. наук, старший научный сотрудник лаборатории дифференцировки лимфоцитов 115478, Москва, Россия

М. Ф Никонова

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

115478, Москва, Россия

Э. Ю Яновская

ГБОУ ВПО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России

117997, Москва, Россия

Е. Е Петряйкина

ГБОУ ВПО «РНИМУ им. Н.И. Пирогова» Минздрава России; ГБУЗ «Морозовская ДГКБ ДЗМ»

117997, Москва, Россия

И. А Пугачева

ГБУЗ «Морозовская ДГКБ ДЗМ»

119049, Москва, Россия

И. Р Самсонович

ГБУЗ «Морозовская ДГКБ ДЗМ»

119049, Москва, Россия

А. А Ярилин

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

115478, Москва, Россия

Список литературы

Дополнительные файлы