Метод комплементации белков для качественной и количественной оценки содержания hTERP в клетке

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Изучение функционирования белков в клетке невозможно без анализа их содержания в клетке. Наиболее используемый метод анализа вестерн-блоттингом не всегда может быть использован из-за невозможности получить антитела, специфично узнающие белок интереса. В то же время вестерн-блоттинг является полуколичественным методом анализа и не позволяет определить точное содержание белка в клетке. В данной работе мы применили метод комплементации белков для качественной и количественной оценки содержания белка hTERP в клетке. При помощи редактирования генома на С-конец белка hTERP был введен довесок HiBiT, комплементация которого с LgBiT восстанавливает активную люциферазу. В результате мы определили содержание белка hTERP в клетке линии НЕК293Т.

Об авторах

М. А. Шамонова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия

М. С. Корягина

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия

В. Л. Шляпина

Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия

О. А. Донцова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН; Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А. Н. Белозерского; Сколковский институт науки и технологий, центр молекулярной и клеточной биологии

Автор, ответственный за переписку.
Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия; Москва, Россия; Москва, Россия

М. П. Рубцова

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, химический факультет; Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН

Email: mprubtsova@gmail.com
Москва, Россия; Москва, Россия

Список литературы

  1. Levy M. Z., Allsop R. C., Futcher A. B., et al. Telomere end-replication problem and cell aging // Journal of Molecular Biology. 1992. Vol. 225, № 4. P. 951–960.
  2. Chow T. T., Zhao Y., Mak S. S., et al. Early and late steps in telomere overhang processing in normal human cells: the position of the final RNA primer drives telomere shortening // Genes & Development. 2012. Vol. 26, № 11. P. 1167–1178.
  3. Fumagalli M., Rossiello F., Clerici M., et al. Telomeric DNA damage is irreparable and causes persistent DNA-damage-response activation // Nat Cell Biol. 2012. Vol. 14, № 4. P. 355–365.
  4. de Lange T. Shelterin-Mediated Telomere Protection // Annual Review of Genetics. 2018. Vol. 52, № 1. P. 223–247.
  5. Liu D., O'Connor M.S., Qin J., et al. Telosome, a Mammalian Telomere-associated Complex Formed by Multiple Telomeric Proteins // Journal of Biological Chemistry. 2004. Vol. 279, № 49. P. 51338–51342.
  6. Harley C. B., Futcher A. B., Greider C. W. Telomeres shorten during ageing of human fibroblasts // Nature. 1990. Vol. 345, № 6274. P. 458–460.
  7. Allsopp R. C., Vaziri H., Patterson C., et al. Telomere length predicts replicative capacity of human fibroblasts. // Proceedings of the National Academy of Sciences. 1992. Vol. 89, № 21. P. 10114–10118.
  8. Morin G. B. The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein that synthesizes TTAGGG repeats // Cell. 1989. Vol. 59, № 3. P. 521–529.
  9. Weng N. P., Levine B. L., June C. H., et al. Regulated expression of telomerase activity in human T lymphocyte development and activation // J. Exp. Med. 1996. Vol. 183, № 6. P. 2471–2479.
  10. Lu W.-Y., Forbes S. J. Telomerase Activity Links to Regenerative Capacity of Hepatocytes // Transplantation. 2018. Vol. 102, № 10. P. 1587–1588.
  11. Holt S. E., Shay J. W. Role of telomerase in cellular proliferation and cancer // J. Cell. Physiol. 1999. Vol. 180, № 1. P. 10–18.
  12. Yashima K., Maitra A., Rogers B. B., et al. Expression of the RNA component of telomerase during human development and differentiation // Cell Growth Differ. 1998. Vol. 9, № 9. P. 805–813.
  13. Rubtsova M., Naraykina J., Vasilkova D., et al. Protein encoded in human telomerase RNA is involved in cell protective pathways // Nucleic Acids Research. 2018.
  14. Pakhomova T., Moshareva M., Vasilkova D., et al. Role of RNA Biogenesis Factors in the Processing and Transport of Human Telomerase RNA // Biomedicines. 2022. Vol. 10, № 6. P. 1275.
  15. Rubtsova M., Dontsova O. How Structural Features Define Biogenesis and Function of Human Telomerase RNA Primary Transcript // Biomedicines. 2022. Vol. 10, № 7. P. 1650.
  16. Xi L., Cech T. R. Inventory of telomerase components in human cells reveals multiple subpopulations of hTR and hTERT // Nucleic Acids Res. 2014. Vol. 42, № 13. P. 8565–8577.
  17. Dixon A. S., Schwinn M. K., Hall M. P., et al. NanoLuc Complementation Reporter Optimized for Accurate Measurement of Protein Interactions in Cells // ACS Chem. Biol. 2016. Vol. 11, № 2. P. 400–408.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Российская академия наук, 2025