ISPOL'ZOVANIE NANOChASTITs DLYa SNIZhENIYa NEGATIVNYKh EFFEKTOV LEKARSTVENNYKh PREPARATOV

Abstract

Full Text

Снижение выраженности побочных эффектов лекарственных препаратов представляет собой актуальную проблему фармации. Для решения данной проблемы применяются различные подходы, в том числе использование новых или модифицированных лекарственных форм. Один из способов уменьшения нежелательных эффектов — применение наноразмерных систем доставки, способных изменить распределение лекарственных веществ в организме. Наличие нежелательных эффектов является серьезным ограничивающим фактором для анксиолитиков бензодиазепинового ряда, в частности феназепама (ФЗ), диазепама, медазепама. Так, бензодиазепины проявляют выраженную анксиолитическую активность, оказывая при этом седативное и миорелаксирующее влияние, что ограничивает возможность применения препаратов этой группы [2]. Включение феназепама в наночастицы (ФЗ-НЧ) позволило снизить седативное и миорелаксирующее действие при введении дозы 1 мг/кг, сохранив при этом идентичную ФЗ-субстанции анксиолитическую активность [1]. При этом не исследовалось действие наносомального ФЗ в более высоких дозах, а также продолжительность воздействия. Вместе с тем целью настоящей работы являлось дальнейшее исследование выраженности нежелательных эффектов при приеме заведомо высоких доз наносомального ФЗ во времени. Наночастицы с ФЗ получали при помощи модифицированной методики анионной полимеризации в водной среде [4]. В основе методики лежит способность мономера бутилцианоакрилата (БЦА) полимеризоваться с образованием стабильных частиц размером 215 ± 10 нм при значениях рН 2—3. Выбор БЦА обусловлен низкой токсичностью, биодеградируемостью и способностью эффективно иммобилизовывать вещества. ФЗ включали в частицы в процессе синтеза, полученные НЧ покрывали полисорбатом-80 (ПС-80), обеспечивающим проникновение через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Подобным образом в настоящее время через ГЭБ транспортирован целый ряд препаратов после внутривенной инъекции полибутилцианоакрилата (ПБЦА)-НЧ, покрытых ПС-80. Среди них лоперамид [5, 10, 11], тубокурарин [6], гексапептид даларгин [8], дипептид киотрофин [12], и антагонист рецептора NMDA MRZ 2/576 [7]. Размер определяли методов лазерного светорассеяния на анализаторе субми-кронных частиц Coulter N4 MD. В результате получены частицы со средним размером 215 ± 15 нм. Исследования проводили на белых беспородных мышах-самцах массой 20—22 г. Животных содержали при 20—22°С в клетках по 15 особей со свободным доступом к пище и воде. Исследовали группы по 12 животных. Препарат вводили интрагастрально при помощи специальной канюли. В качестве препарата сравнения использовали субстанцию ФЗ в идентичной дозировке, отрицательным контролем служил изотонический раствор NaCl. Седативную активность изучали при помощи тест-методики "открытое поле". Животных помещали в центр установки, наблюдение проводили в течение 1 мин. Фиксировали число пересеченных квадратов, вертикальных стоек, обследованных отверстий (норок), траекторию перемещения животного (вдоль стен либо по центру). Группы формировали с учетом контрольного пробега животных (до введения препарата) таким образом, чтобы между средними значениями пробега в группах не было статистически значимой разницы. Группа 1 — контроль, 0,9% раствор NaCl, группа 2 — субстанция ФЗ, группа 3 — ФЗ-НЧ. Для грызунов характерна естественная боязнь открытых пространств, проявляющаяся преимущественным перемещением по периметру установки "открытое поле". Полученные данные трактовали по следующему принципу: уменьшение числа перемещений свидетельствовало о наличии седативного действия препарата, изменение траектории движения животных в сторону увеличения перемещений через центр установки — о тенденции к анти-фобическому действию. Миорелаксацию оценивали следующим образом: животное подвешивали на планку за передние лапы таким образом, чтобы нижняя часть туловища находилась в свободно подвешенном состоянии, не касаясь поверхности, а само животное могло за счет мышечного усилия забираться на планку. Наблюдение проводили в течение 15 с. Мыши без миорелаксирующего эффекта или со слабовы-раженным эффектом без труда забирались на планку либо висели в течение указанного времени. Животные с мио-релаксирующим эффектом падали с планки до истечения контрольного интервала (15 с). В тесте "открытое поле" было показано, что животные, получавшие ФЗ-НЧ в дозировке 3 мг/кг значимо не различались от контрольной группы в течение первых 2 ч просмотра (рис. 1). Так, средний пробег по открытому полю составлял от 26,3 ± 1,76 для ФЗ-НЧ и 22,4 ± 2,68 для контроля при первом просмотре до 10,4 ± 2,43 и 12 ± 1,19 при просмотре через 4 ч после введения препарата. Статистически значимое различие в пробеге между данными группами наблюдалось только через 3 ч после введения препарата, значения пробегов составляли 15 ± 1,38 для группы контроля и 10,4 ± 2,86 для группы ФЗ-НЧ. Таким ---А--- Контроль 0,9% раствор NaCI Рис. 1. Седативный эффект наносомального феназепама и феназепама — субстанции в дозировке 3 мг/кг в разное время после введения. Феназепам 3 мк/кг —■— Феназепам-НЧ 3 мк/кг Контроль 0,9% раствор NaCI Рис. 2. Миорелаксирующий эффект наносомального феназепама и феназепама — субстанции в дозировке 3 мг/кг в разное время после введения. образом, можно говорить о появлении слабовыраженно-го седативного эффекта ФЗ-НЧ к 3-му часу наблюдений. В. А. Разживиной и соавт. [1] показано, что ФЗ-НЧ в дозе 1 мг/кг не оказывает седативное действие, тогда как субстанция дает этот эффект. Общее снижение двигательной активности у животных контрольной группы может быть объяснено привыканием к установке и потерей интереса к исследовательской деятельности. Субстанция ФЗ в идентичной дозировке проявила выраженное седативное действие уже через 15 мин после введения. Величина пробега снизилась с 22,11 ± 2,79 до 12,5 ± 2,23, что в 1,83 раза меньше аналогичного показателя для ФЗ-НЧ. Траектория движения животных контрольной группы по установке "открытое поле" проходила преимущественно по границе установки, рядом со стенками. Животные избегали длительное пребывание на открытом пространстве, что обусловливается естественной реакцией грызунов. Вместе с тем у групп ФЗ и ФЗ-НЧ отмечено изменение траектории движения в сторону более частого перемещения через центр установки, что может говорить о тенденции к антифобическому действию препарата и согласуется с данными В. А. Разживиной и соавт. [1]. При оценке миорелаксирующего действия (рис. 2). было показано существенное различие эффектов у живот ных. Так, миорелаксирующее действие ФЗ-субстанции в дозировке 3 мг/кг было зарегистрировано через 15 мин после введения у 25% животных, а наибольшее количество эффектов зарегистрировано через 30 мин после введения препарата и составляло 33,33% (4 животных из 12). При последующих просмотрах число животных с миоре-лаксацией сокращалось, и к 3-му часу она наблюдалась лишь у 1 (8,33%) животного. К 4-му часу эксперимента у вышеуказанной особи также был отмечен миорелакси-рующий эффект, что может объясняться индивидуальной чувствительностью к препарату. В то же время миорелаксирующий эффект ФЗ-НЧ в дозировке 3 мг/кг проявился только через 30 мин после введения у 8,33% животных, достиг пика к 1-му часу наблюдений — у 16,33% (2 животных), после чего количество животных с миорелаксацией стало снижаться. К 3-му часу количество животных с эффектом было равным в обеих группах, а к 4-му часу миорелаксирующий эффект ФЗ-НЧ отсутствовал. Исследование данного эффекта при дозе ФЗ-НЧ 1 мг/кг показало практически полное его отсутствие [1]. Полученные данные свидетельствуют о снижении выраженности седативного и миорелаксирующего действия ФЗ-НЧ в дозировке 3 мг/кг относительно ФЗ-субстанции. При увеличении дозы препаратов до 5 мг/кг (рис. 3) наблюдалось появление седативного и миорелаксирую-щего эффекта ФЗ-НЧ. to о CO α s з O S ® >< O 1 * s )S O α 25pp 2 ч -♦-■ Феназепам 5 мк/кг —■ -A-- Контроль 0,9% раствор NaCI 3 ч Феназепам-НЧ 5 мк/кг 4 ч Рис. 3. Седативный эффект наносомального феназепама и феназепама — субстанции в дозировке 5 мг/кг в разное время после введения. Феназепам 5 мк/кг —■— Феназепам-НЧ 5 мк/кг —А— Контроль 0,9% раствор NaCI Рис. 4. Миорелаксирующий эффект наносомального феназепама и феназепама — субстанции в дозировке 5 мг/кг в разное время после введения. Значение пробега у животных группы ФЗ-НЧ через 15 мин после введения препарата было в 4,17 раза выше, чем у животных, получавших ФЗ-субстанции, и составило 16,5 ± 2,34 против 3,95 ± 1,04. Дальнейшая оценка двигательной активности показала достоверную разницу в величине пробега. Так, к 4-му часу наблюдений у группы, получавшей ФЗ-НЧ, было отмечено увеличение двигательной активности до 11,2 ± 1,29. Это значение близко к величине пробега в группе контроля 10 ± 1,47, что свидетельствует о снижении седативного действия ФЗ-НЧ к 4-му часу после приема. Выраженность миорелаксирующего действия при введении экспериментальным животным ФЗ-субстанции и ФЗ-НЧ в дозе 5 мг/кг различалась (рис. 4). Субстанция ФЗ через 15 мин после введения вызывала миорелаксацию у 75% животных данной группы, а через 30 мин эффект проявлялся у 91,67% животных (11 мышей из 12). Далее количество животных с эффектом снижалось и к 4-му часу составило 8,33%. Действие ФЗ-НЧ начинает проявляться спустя 15 мин после его введения, однако максимальный эффект достигался к 1-му часу и был отмечен у 50% подопытных животных. В течение 2 ч происходило постепенное снижение количества животных с миорелаксацией, которое к 3-му часу составило 33,33% с последующим уменьшением до 8,33%. Следует отметить, что максимальное количе ство животных с миорелаксацией в группе ФЗ-НЧ в 1,83 раза ниже, чем среди получавших ФЗ-субстанцию. Таким образом, ФЗ-НЧ в дозе 5 мг/кг оказывает седативное и миорелаксирующее действие, однако степень выраженности данных нежелательных эффектов значительно меньше, чем субстанции ФЗ. При сопоставлении полученных данных относительно доз 3 и 5 мг/кг следует отметить более медленное развитие миорелаксирующего эффекта ФЗ-НЧ в сравнении с ФЗ-субстанцией, а сам эффект проявляется у значительно меньшего количества подопытных животных. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что создание наносомальных лекарственных форм позволяет повышать безопасность применения препаратов в высоких дозах за счет снижения выраженности побочных эффектов.