THE CONTENT OF SERUM CYTOTOXINS UNDER LIVER CIRRHOSIS OF VIRAL ETIOLOGY AT VARIOUS STAGES OF COMPENSATION

Full Text

Изучению осложнений при циррозе печени (ЦП) посвящено множество клинических и экспериментальных исследований, достигнуты успехи в изучении этиологических и предрасполагающих к этому заболеванию факторов [1, 2]. Вместе с тем многие вопросы патогенеза осложнений при ЦП остаются ещё недостаточно изученными, а результаты научных исследований, проводимых в этом направлении, противоречивы. В настоящее время наиболее приемлемой теоретической основой, объясняющей этиологию развития осложнений при циррозе, считается теория периферической вазодилатации, однако и она не даёт ответа на все существующие вопросы [3, 4]. Ещё недостаточно изучены частота возникновения и характер осложнений при хронических заболеваниях печени на фоне влияния цитокинов на активацию патологического процесса и нарушение гепатопортального кровотока [5]. Кроме того, существуют данные об активации цитокинового каскада при патологии печени. Так, гиперпродукция фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) вызывает повреждение печени и коррелирует с тяжестью течения цирротического процесса [6]. В то же время нет чётких данных о взаимосвязи между функциональными показателями печени и уровнями цитокинемий при циррозах [7, 8]. Учитывая разнородность данных литературы, касающихся уровня цитокинов в сыворотке крови и их влияния, исследования механизмов патогенеза и осложнений при циррозах необходимо продолжать [9, 10]. Цель исследования - изучить сывороточные концентрации интерлейкина-2 (ИЛ-2), ИЛ-6, ФНО-α и их взаимосвязи для определения цитокинового статуса у пациентов с ЦП вирусной этиологии в зависимости от класса тяжести по Child - Pugh и уровня портального давления. Материал и методы Обследовано 87 (81,3%) мужчин и 20 (18,7%) женщин)c ЦП в исходе хронических вирусных гепатитов(ХВГ). При диагностике методом ПЦР инфекции HBV, HCV, HBV + HCV отмечались в 35,1, 46,1 и 18,8% случаев. Возраст больных колебался от 30 до 69 лет (средний возраст составил 57,3 ± 4,6 года). На основании классификации ЦП по Child - Pugh (1996) пациенты с различными уровнями ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНОα были разделены на 3 группы: І группу составили больные (n = 35) класса А, ІІ группу - больные (n = 37) класса В, в ІІІ группу вошли больные (n = 35) класса С. Контрольную группу составили 30 здоровых добровольцев (доноры крови). Клиническая диагностика ЦП, оценка его степени тяжести, основные и дополнительные инструментальные исследования проводились в соответствии с рекомендациями протокола рабочей группы 11 Всемирного конгресса гастроэнтерологов (2015). Для подтверждения диагноза ЦП, его этиологии, стадии компенсации и осложнений изучались клиническая картина и анамнез заболевания, использовался комплекс клинических, лабораторных и инструментальных методов диагностики. Клинико-биохимические исследования крови проводились ферментным, колометрическим, ферментно-колометрическим, иммунотурбидиметрическим и кинетическим методами с использованием диагностического комплекса Cobas 6000 (Roche Diagnostics). Определение уровня ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α было основано на методе твердофазного «сэндвич» - варианте иммуноферментного анализа. Для получения результатов и динамических наблюдений, адекватно отражающих изменение концентраций ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α в крови, использовались наборы реагентов одного наименования («Интерлейкин-2-ифа-бест», «Интерлейкин-6-ифа-бест» и «ФНО-альфа-ифа-бест») и одного предприятия-изготовителя (Нижний Новгород). Концентрации цитокинов измерялись в крови с 9 до 11 ч до лечения. Стадия ЦП оценивалась по METAVIR с использованием классификационной счётной шкалы Bonacini и соноэластографии. Уровень портального давления определялся ультразвуковой допплеросонографией с использованием эмперической формулы расчёта, прямой трансюгулярной портографии с портометрией. Также наличие высокого портального давления подтверждалось панэндоскопией, спленопортографией, мезентерикоспленопортографией, патофлебографией. Обработка полученных клинических и лабораторно-инструментальных данных осуществлялась с помощью критериев параметрической и непараметрической статистик. Была проведена группировка данных по вариационным рядам с учётом величины статистической значимости результатов при p < 0,05 по t-значениям Стьюдента, для характеристик рассеяния использовалась величина плотности Гаусса по величинам интерквартильного размаха (interqurtile range - QR) как робастного аналога дисперсии (Е0,25;0,75 = X0,75-0,25) с обязательным вычислением наличия “выбросов”. Для определения ранга и взаимосвязи между полученными признаками из многомерных методов нами использовался кластерный и факторный анализы. В сравнительном анализе учитывался показатель M ± SD (М - средняя величина, SD - стандартное отклонение). С помощью статистики Спирмена осуществлялось определение степени взаимосвязи между отдельными признаками. Непосредственно статистическая обработка материала осуществлялась при помощи статистической программы StatSoft Statistica, версия 10. Результаты При ЦП вирусной этиологии в зависимости от стадии компенсации отмечается общая тенденция к увеличению уровня всех сывороточных концентраций ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α (табл. 1). Так, при ЦП класса А уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α колебались в пределах 1,83-2,32 пг/мл, 5,15-9,32 пг/мл, 1,23-3,15 пг/мл и в среднем составили 2,02 ± 0,17, 6,47 ± 0,9, 2,47 ± 0,61 пг/мл соответственно. При ЦП класса В уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α колебались в пределах 1,02-9,35, 1,11-14,95, 1,78-3,11 пг/мл и в среднем составили 3,66 ± 2,99, 8,97 ± 3,95, 2,62 ± 0,47 пг/мл соответственно. Степени взаимосвязей между уровнями ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α при ЦП классов А, В, С представлены в табл. 2. Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что между сывороточными концентрациями цитокинов при ЦП классов А, В, С наиболее значимые корреляционные взаимосвязи наблюдаются между ФНО-α и ИЛ-6 при ЦП класса А (r = 0,499), ФНО-α и ИЛ-2 при ЦП класса В (r = 0,521). Следовательно, повышение сывороточной концентрации ФНО-α сопровождается увеличением концентрации ИЛ-2 и ИЛ-6 у пациентов с ЦП. Обсуждение Сывороточный уровень цитокинемий при ЦП всех классов статистически значимо выше по сравнению с таковым у доноров. В зависимости от стадии компенсации ЦП отмечается тенденция к увеличению уровня всех исследуемых в крови цитокинов, но в пределах референсных значений, за исключением ИЛ-6. Различия в среднем уровне цитокинов отмечались только между ЦП классов А и С. Кроме того, у больных ЦП в зависимости от стадии компенсации отмечается общая тенденция к увеличению уровня всех исследуемых в крови цитокинов и преимущественно за счёт ИЛ-6. Так, колебания уровня ИЛ-6 у всех больных при ЦП класса А находились в пределах референсных значений, при ЦП класса В - у 42,5% из 40 больных, а при ЦП класса С - только у 30,8% из 39 пациентов. У остальных больных ЦП в группах классов В и С уровень колебаний ИЛ-6 превышал референсные значения, у пациентов с ЦП класса С колебания ИЛ-6 наблюдались в пределах 14,89 ± 4,96 пг/мл. Также в литературе показано, что если ФНО-α способствует активации купферовских клеток, то можно предположить наличие динамики процесса перестройки печёночной паренхимы [11]. ИЛ-6 в высоких концентрациях стимулирует выработку в гепатоцитах белков острой фазы, что вторично может приводить к эндотелиальной дисфункции, повышению прокоагулянтной активности [12]. Секреция ИЛ-6 стимулируется ФНО-α, в свою очередь ИЛ-6 может подавлять дальнейшее образование ФНО-α [13]. ИЛ-6 играет важную роль в прогрессировании печёночных и системных гемодинамических изменений, а показатели цитолитического синдрома и гепатопортального кровотока положительно коррелируют с уровнем ИЛ-6 [14]. Полученные нами результаты не противоречат результатам, полученным другими авторами. Таким образом, в сыворотке крови больных ЦП в сравнении с донорами наблюдалось повышение уровня всех исследованных цитокинов, что способствует поддержанию воспалительного процесса и усилению фиброгенеза в печени. Избыточное содержание провоспалительных цитокинов - ФНО-а может усугублять имеющийся дисбаланс цитокиновой системы, что способствует снижению иммунитета. Кроме того, при исследовании цитокинового профиля у больных ЦП с маркёрами ХВГ В и С обнаружены существенные и разнонаправленные изменения содержания многих лимфокинов в сыворотке крови, входящих в набор иммунорегуляторных молекул, характерный для клона Т-лимфоцитов, что может отражать усиление активности Т-хелперных клеток первого типа. Это кажется вполне естественным, если учитывать хорошо известный факт, что вирусная инфекция активирует в первую очередь клеточное звено иммунитета. Также уровень секреции провоспалительных цитокинов может отражать степень дисфункции печени и активность воспалительного процесса. В тоже время сывороточная концентрация ИЛ-6 при ЦП может возрастать или оставаться без динамики на последующих периодах прогрессирования заболевания. Заключение Представленные данные указывают на значительную патогенетическую роль изменения продукции цитокинов в процессе формирования хронического воспалительного процесса. Отмечается повышение сывороточной концентрации ИЛ-2 и ФНО-α при ЦП. При этом присутствовала корреляция с параметрами воспалительного процесса (активность трансаминаз - АлАТ, АсАТ) со степенью функциональных нарушений (протромбиновое время, концентрация сывороточного альбумина), гиперпродукция провоспалительных цитокинов ФНО-α, ИЛ-6 вызывает повреждения печени и коррелирует с тяжестью течения ЦП. Кроме того, на фоне снижения компенсации ЦП отмечается увеличение сывороточного уровня ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α в пределах референсных значений, за исключением уровня ИЛ-6 при ЦП класса С с наибольшим уровнем портального давления. У данной категории больных уровень ИЛ-6 превышает референсные значения и находится в пределах 9,94- 25,21 пг/мл со средней концентрацией 14,89±4,96 пг/мл. Количественные соотношения и степень взаимосвязи между цитокинами определяются компенсацией цирроза. Значимая корреляционная связь отмечается между ФНО-α и ИЛ-6 (r = 0,499) при ЦП класса А, между ФНО-α и ИЛ-2 (r = 0,521) при ЦП класса В. Количественные соотношения между цитокинами могут определяться направлением развития воспалительного ответа и стадией компенсации ЦП.

About the authors

Vladimir Evgenievich Kulikov

The Ulyanovsk state university

Email: kulikov69@bk.ru
MD, Professor of the Department of Hospital Therapy of the Federal State Educational Establishment of Higher Education of the «Ulyanovsk State University» of the Ministry of Education and Science of the Russian Federation 432017, Ulyanovsk, Russian Federation

M. G Sharafutdinov

The Ulyanovsk state university

432017, Ulyanovsk, Russian Federation

M. E Khapman

The Ulyanovsk state university

432017, Ulyanovsk, Russian Federation

M. A Toneeva

The Ulyanovsk state university

432017, Ulyanovsk, Russian Federation

K. V Nikolaeva

The Ulyanovsk state university

432017, Ulyanovsk, Russian Federation

A. N Sapozhnikov

The Ulyanovsk state university

432017, Ulyanovsk, Russian Federation

L. G Proshina

The Yaroslav the Wise Novgorod state university

173003, Veliky Novgorod, Russian Federation

A. I Khoroshevskaya

The Yaroslav the Wise Novgorod state university

173003, Veliky Novgorod, Russian Federation

References

Supplementary files