СОДЕРЖАНИЕ СЫВОРОТОЧНЫХ ЦИТОКИНОВ ПРИ ЦИРРОЗАХ ПЕЧЕНИ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ НА РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ КОМПЕНСАЦИИ

Полный текст

Изучению осложнений при циррозе печени (ЦП) посвящено множество клинических и экспериментальных исследований, достигнуты успехи в изучении этиологических и предрасполагающих к этому заболеванию факторов [1, 2]. Вместе с тем многие вопросы патогенеза осложнений при ЦП остаются ещё недостаточно изученными, а результаты научных исследований, проводимых в этом направлении, противоречивы. В настоящее время наиболее приемлемой теоретической основой, объясняющей этиологию развития осложнений при циррозе, считается теория периферической вазодилатации, однако и она не даёт ответа на все существующие вопросы [3, 4]. Ещё недостаточно изучены частота возникновения и характер осложнений при хронических заболеваниях печени на фоне влияния цитокинов на активацию патологического процесса и нарушение гепатопортального кровотока [5]. Кроме того, существуют данные об активации цитокинового каскада при патологии печени. Так, гиперпродукция фактора некроза опухоли альфа (ФНО-α) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) вызывает повреждение печени и коррелирует с тяжестью течения цирротического процесса [6]. В то же время нет чётких данных о взаимосвязи между функциональными показателями печени и уровнями цитокинемий при циррозах [7, 8]. Учитывая разнородность данных литературы, касающихся уровня цитокинов в сыворотке крови и их влияния, исследования механизмов патогенеза и осложнений при циррозах необходимо продолжать [9, 10]. Цель исследования - изучить сывороточные концентрации интерлейкина-2 (ИЛ-2), ИЛ-6, ФНО-α и их взаимосвязи для определения цитокинового статуса у пациентов с ЦП вирусной этиологии в зависимости от класса тяжести по Child - Pugh и уровня портального давления. Материал и методы Обследовано 87 (81,3%) мужчин и 20 (18,7%) женщин)c ЦП в исходе хронических вирусных гепатитов(ХВГ). При диагностике методом ПЦР инфекции HBV, HCV, HBV + HCV отмечались в 35,1, 46,1 и 18,8% случаев. Возраст больных колебался от 30 до 69 лет (средний возраст составил 57,3 ± 4,6 года). На основании классификации ЦП по Child - Pugh (1996) пациенты с различными уровнями ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНОα были разделены на 3 группы: І группу составили больные (n = 35) класса А, ІІ группу - больные (n = 37) класса В, в ІІІ группу вошли больные (n = 35) класса С. Контрольную группу составили 30 здоровых добровольцев (доноры крови). Клиническая диагностика ЦП, оценка его степени тяжести, основные и дополнительные инструментальные исследования проводились в соответствии с рекомендациями протокола рабочей группы 11 Всемирного конгресса гастроэнтерологов (2015). Для подтверждения диагноза ЦП, его этиологии, стадии компенсации и осложнений изучались клиническая картина и анамнез заболевания, использовался комплекс клинических, лабораторных и инструментальных методов диагностики. Клинико-биохимические исследования крови проводились ферментным, колометрическим, ферментно-колометрическим, иммунотурбидиметрическим и кинетическим методами с использованием диагностического комплекса Cobas 6000 (Roche Diagnostics). Определение уровня ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α было основано на методе твердофазного «сэндвич» - варианте иммуноферментного анализа. Для получения результатов и динамических наблюдений, адекватно отражающих изменение концентраций ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α в крови, использовались наборы реагентов одного наименования («Интерлейкин-2-ифа-бест», «Интерлейкин-6-ифа-бест» и «ФНО-альфа-ифа-бест») и одного предприятия-изготовителя (Нижний Новгород). Концентрации цитокинов измерялись в крови с 9 до 11 ч до лечения. Стадия ЦП оценивалась по METAVIR с использованием классификационной счётной шкалы Bonacini и соноэластографии. Уровень портального давления определялся ультразвуковой допплеросонографией с использованием эмперической формулы расчёта, прямой трансюгулярной портографии с портометрией. Также наличие высокого портального давления подтверждалось панэндоскопией, спленопортографией, мезентерикоспленопортографией, патофлебографией. Обработка полученных клинических и лабораторно-инструментальных данных осуществлялась с помощью критериев параметрической и непараметрической статистик. Была проведена группировка данных по вариационным рядам с учётом величины статистической значимости результатов при p < 0,05 по t-значениям Стьюдента, для характеристик рассеяния использовалась величина плотности Гаусса по величинам интерквартильного размаха (interqurtile range - QR) как робастного аналога дисперсии (Е0,25;0,75 = X0,75-0,25) с обязательным вычислением наличия “выбросов”. Для определения ранга и взаимосвязи между полученными признаками из многомерных методов нами использовался кластерный и факторный анализы. В сравнительном анализе учитывался показатель M ± SD (М - средняя величина, SD - стандартное отклонение). С помощью статистики Спирмена осуществлялось определение степени взаимосвязи между отдельными признаками. Непосредственно статистическая обработка материала осуществлялась при помощи статистической программы StatSoft Statistica, версия 10. Результаты При ЦП вирусной этиологии в зависимости от стадии компенсации отмечается общая тенденция к увеличению уровня всех сывороточных концентраций ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α (табл. 1). Так, при ЦП класса А уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α колебались в пределах 1,83-2,32 пг/мл, 5,15-9,32 пг/мл, 1,23-3,15 пг/мл и в среднем составили 2,02 ± 0,17, 6,47 ± 0,9, 2,47 ± 0,61 пг/мл соответственно. При ЦП класса В уровни ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α колебались в пределах 1,02-9,35, 1,11-14,95, 1,78-3,11 пг/мл и в среднем составили 3,66 ± 2,99, 8,97 ± 3,95, 2,62 ± 0,47 пг/мл соответственно. Степени взаимосвязей между уровнями ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α при ЦП классов А, В, С представлены в табл. 2. Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что между сывороточными концентрациями цитокинов при ЦП классов А, В, С наиболее значимые корреляционные взаимосвязи наблюдаются между ФНО-α и ИЛ-6 при ЦП класса А (r = 0,499), ФНО-α и ИЛ-2 при ЦП класса В (r = 0,521). Следовательно, повышение сывороточной концентрации ФНО-α сопровождается увеличением концентрации ИЛ-2 и ИЛ-6 у пациентов с ЦП. Обсуждение Сывороточный уровень цитокинемий при ЦП всех классов статистически значимо выше по сравнению с таковым у доноров. В зависимости от стадии компенсации ЦП отмечается тенденция к увеличению уровня всех исследуемых в крови цитокинов, но в пределах референсных значений, за исключением ИЛ-6. Различия в среднем уровне цитокинов отмечались только между ЦП классов А и С. Кроме того, у больных ЦП в зависимости от стадии компенсации отмечается общая тенденция к увеличению уровня всех исследуемых в крови цитокинов и преимущественно за счёт ИЛ-6. Так, колебания уровня ИЛ-6 у всех больных при ЦП класса А находились в пределах референсных значений, при ЦП класса В - у 42,5% из 40 больных, а при ЦП класса С - только у 30,8% из 39 пациентов. У остальных больных ЦП в группах классов В и С уровень колебаний ИЛ-6 превышал референсные значения, у пациентов с ЦП класса С колебания ИЛ-6 наблюдались в пределах 14,89 ± 4,96 пг/мл. Также в литературе показано, что если ФНО-α способствует активации купферовских клеток, то можно предположить наличие динамики процесса перестройки печёночной паренхимы [11]. ИЛ-6 в высоких концентрациях стимулирует выработку в гепатоцитах белков острой фазы, что вторично может приводить к эндотелиальной дисфункции, повышению прокоагулянтной активности [12]. Секреция ИЛ-6 стимулируется ФНО-α, в свою очередь ИЛ-6 может подавлять дальнейшее образование ФНО-α [13]. ИЛ-6 играет важную роль в прогрессировании печёночных и системных гемодинамических изменений, а показатели цитолитического синдрома и гепатопортального кровотока положительно коррелируют с уровнем ИЛ-6 [14]. Полученные нами результаты не противоречат результатам, полученным другими авторами. Таким образом, в сыворотке крови больных ЦП в сравнении с донорами наблюдалось повышение уровня всех исследованных цитокинов, что способствует поддержанию воспалительного процесса и усилению фиброгенеза в печени. Избыточное содержание провоспалительных цитокинов - ФНО-а может усугублять имеющийся дисбаланс цитокиновой системы, что способствует снижению иммунитета. Кроме того, при исследовании цитокинового профиля у больных ЦП с маркёрами ХВГ В и С обнаружены существенные и разнонаправленные изменения содержания многих лимфокинов в сыворотке крови, входящих в набор иммунорегуляторных молекул, характерный для клона Т-лимфоцитов, что может отражать усиление активности Т-хелперных клеток первого типа. Это кажется вполне естественным, если учитывать хорошо известный факт, что вирусная инфекция активирует в первую очередь клеточное звено иммунитета. Также уровень секреции провоспалительных цитокинов может отражать степень дисфункции печени и активность воспалительного процесса. В тоже время сывороточная концентрация ИЛ-6 при ЦП может возрастать или оставаться без динамики на последующих периодах прогрессирования заболевания. Заключение Представленные данные указывают на значительную патогенетическую роль изменения продукции цитокинов в процессе формирования хронического воспалительного процесса. Отмечается повышение сывороточной концентрации ИЛ-2 и ФНО-α при ЦП. При этом присутствовала корреляция с параметрами воспалительного процесса (активность трансаминаз - АлАТ, АсАТ) со степенью функциональных нарушений (протромбиновое время, концентрация сывороточного альбумина), гиперпродукция провоспалительных цитокинов ФНО-α, ИЛ-6 вызывает повреждения печени и коррелирует с тяжестью течения ЦП. Кроме того, на фоне снижения компенсации ЦП отмечается увеличение сывороточного уровня ИЛ-2, ИЛ-6 и ФНО-α в пределах референсных значений, за исключением уровня ИЛ-6 при ЦП класса С с наибольшим уровнем портального давления. У данной категории больных уровень ИЛ-6 превышает референсные значения и находится в пределах 9,94- 25,21 пг/мл со средней концентрацией 14,89±4,96 пг/мл. Количественные соотношения и степень взаимосвязи между цитокинами определяются компенсацией цирроза. Значимая корреляционная связь отмечается между ФНО-α и ИЛ-6 (r = 0,499) при ЦП класса А, между ФНО-α и ИЛ-2 (r = 0,521) при ЦП класса В. Количественные соотношения между цитокинами могут определяться направлением развития воспалительного ответа и стадией компенсации ЦП.

Об авторах

Владимир Евгеньевич Куликов

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

Email: kulikov69@bk.ru
доктор мед. наук, профессор кафедры госпитальной терапии ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки РФ, 432017, Ульяновск 432017, г. Ульяновск

М. Г Шарафутдинов

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

432017, г. Ульяновск

М. Э Хапман

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

432017, г. Ульяновск

М. А Тонеева

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

432017, г. Ульяновск

К. В Николаева

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

432017, г. Ульяновск

А. Н Сапожников

ФГБОУ ВО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки

432017, г. Ульяновск

Л. Г Прошина

ФГБОУ ВО «Новгородский государственный университет им. Ярослава Мудрого»

173003, г. Великий Новгород

А. И Хорошевская

ФГБОУ ВО «Новгородский государственный университет им. Ярослава Мудрого»

173003, г. Великий Новгород

Список литературы

Дополнительные файлы